ELISA - Ujian Imunosorben Berkaitan Enzim: Transkrip

Isi kandungan:

ELISA - Ujian Imunosorben Berkaitan Enzim: Transkrip
ELISA - Ujian Imunosorben Berkaitan Enzim: Transkrip

Video: ELISA - Ujian Imunosorben Berkaitan Enzim: Transkrip

Video: ELISA - Ujian Imunosorben Berkaitan Enzim: Transkrip
Video: ELISA (Enzim-linked immunosorbent assay) pembahasan materi dan prosedur kerja 2024, Mac
Anonim

Kaedah diagnostik (ELISA) bersifat informatif dan tidak terlalu mahal, oleh itu banyak makmal menawarkan kaedah ini kepada pelanggan mereka (ujian imunosorben berkaitan enzim). Kajian ini dilakukan pada waktu perut kosong, darah untuk analisis diambil dari urat kubital pesakit. Sebaiknya jangan merokok atau minum alkohol sebelum ELISA.

Kandungan artikel:

  • 1 Apa itu ujian darah ELISA
  • 2 Apa itu imunoglobulin
  • 3 Bagaimana ELISA darah dilakukan
  • 4 Imunoassay terhadap parasit oleh ELISA
  • 5 Cara ELISA digunakan
  • 6 Ujian untuk analisis darah imunologi oleh ELISA
  • 7 Skop analisis imunologi darah oleh ELISA
  • 8 Petunjuk penggunaan dan penyakit yang dikesan oleh ELISA
  • 9 Kelebihan kaedah ELISA
  • 10 Kekurangan kaedah ELISA
  • 11 Hasil ELISA yang mungkin

Apa itu ujian darah ELISA

Di antara kaedah analisis darah, yang memungkinkan untuk menilai kemampuan tubuh untuk melawan penyakit berjangkit dan menunjukkan fasa penyakit, analisis imunosorben berkaitan enzim (ELISA) menempati tempat yang penting. Menjalankan kajian ini memungkinkan untuk menilai secara komprehensif aktiviti fungsi pelindung darah dan mengenal pasti keadaan imunodefisiensi dalam patologi berjangkit, serta penyakit darah, proses autoimun, masalah hormon.

Ini adalah kajian makmal yang membolehkan anda menentukan keberadaan antibodi spesifik (faktor pelindung darah protein) terhadap antigen tertentu (agen patogen). Antara antibodi, imunoglobulin, yang boleh wujud dalam bentuk imunokompleks, sangat penting.

Menguraikan ujian darah ELISA
Menguraikan ujian darah ELISA

Imunoglobulin dihasilkan sebagai akibat reaksi neurohumoral kompleks imuniti manusia, yang timbul sebagai tindak balas terhadap pengenalan antigen asing. Untuk setiap jenis agen patogen, antibodi spesifiknya sendiri dihasilkan. Mereka bertindak dengan "mengikat" antigen atau mikroorganisma patologi, membentuk sebatian kompleks "antigen-antibodi" dengan peneutralan berikutnya, lisis enzimatik, reaksi fagositosis dan penarikan dari badan. Dengan adanya kompleks tertentu kaedah ELISA menentukan jenis patogen atau bahan berbahaya yang terdapat pada pesakit.

Oleh kerana harga dan penggunaan darah yang rendah sebagai biomaterial, kaedah ini digunakan sebagai kaedah pemeriksaan. Sebagai contoh, jika dicurigai parasitosis, pesakit menderma darah untuk menentukan antibodi terhadap cacing gelang, lamblia, dll. Sekiranya hasilnya positif, maka anda tidak harus segera mula merawat parasit - anda perlu membandingkan gambaran klinikal, hasil ELISA dan, mungkin, hasil kaedah pemeriksaan lain.

Perlu diingat bahawa setelah rawatan selesai, antibodi dapat tinggal di dalam tubuh kita untuk waktu yang sangat lama, walaupun setelah jangkitan telah meninggalkan tubuh kita, iaitu. apa yang disebut "serologi parut" kekal. Contohnya, terdapat ribuan bintang di langit malam. Banyak bintang-bintang ini telah lama mati, tetapi cahaya mereka telah bersinar hingga kini, selama berabad-abad. Sebenarnya, kita hanya melihat jejak bintang. Ada cahaya, tetapi bintang itu telah lama hilang.

Menguraikan ujian darah ELISA
Menguraikan ujian darah ELISA

Tetapi jika tidak ada cahaya, ini tidak bermaksud bahawa bintang itu tidak ada di sana. Ia sama dengan antibodi. Kehadiran mereka tidak menjamin kehadiran agen jangkitan yang diinginkan di dalam badan. Ketiadaan antibodi tidak bermaksud tidak ada jangkitan. Sekiranya hasil analisis oleh ELISA positif, maka ini bermakna bahawa anda perlu mencari jangkitan dengan kaedah yang lebih spesifik dan mahal - PCR, kultur bakteriologi. Hasil positif yang salah adalah mungkin jika beberapa mikroba mempunyai struktur antigenik yang serupa, maka antibodi "serupa" akan dihasilkan untuk mikroba yang berbeza.

Apa itu imunoglobulin

5 kelas utama imunoglobulin telah ditemui dan dikaji - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. peranan yang lain belum dapat dijelaskan sepenuhnya dan ia berada pada tahap penyelidikan saintifik.

Tugas utama imunoglobulin A (IgA) adalah fungsi perlindungan membran mukus saluran pernafasan, saluran gastrousus dan sistem kencing. Dengan permulaan penyakit yang teruk, mustahil untuk mengenal pasti mereka. Kompleks pelindung ini muncul hanya dari 2 minggu permulaan penyakit, kadang-kadang kemudian. Sebilangan besar imunoglobulin A tertumpu pada tisu mukosa. Lebih kurang 80%. Selebihnya antibodi beredar di dalam darah.

Fungsi utamanya adalah untuk meneutralkan dan memusnahkan mikroorganisma. Setelah manifestasi akut penyakit ini reda, jumlah imunoglobulin ini mulai berkurang dan hilang sepenuhnya sehingga 8 minggu setelah bermulanya penyakit. Sekiranya IgA dikesan di kemudian hari, maka ini menunjukkan penyesuaian proses.

Penanda utama dan pertama fasa akut patologi berkembang adalah imunoglobulin kelas M (IgM). Mereka dijumpai pada hari ke-5 dari permulaan malaise. Kehadiran mereka dalam darah dapat ditentukan selama kira-kira 6 minggu. Kemudian mereka mula hilang dengan cepat.

Menguraikan ujian darah ELISA
Menguraikan ujian darah ELISA

Tindak balas imun yang tersisa dicirikan oleh kehadiran imunoglobulin kelas G (IgG) dalam darah. Kemunculan faktor-faktor ini dalam darah dikesan kira-kira sebulan setelah bermulanya penyakit. Di masa depan, mereka dapat ditentukan selama berbulan-bulan, bertahun-tahun dan bahkan sepanjang hidup, melakukan fungsi perlindungan terhadap kembalinya (kambuh) penyakit ini, dan dalam beberapa kes menjadikannya mustahil untuk perkembangan patologi sekunder.

Sekiranya jumlah imunoglobulin G mula meningkat lagi, maka disyaki jangkitan semula. Kesimpulan yang serupa dapat dibuat dengan menjalankan dua atau tiga ujian yang dibuat dengan selang waktu 2 minggu.

Immunoglobulin E (IgE) digunakan dalam amalan parasitologi. Imunoglobulin D (IgD) terletak pada B-limfosit dan didapati dalam kepekatan rendah pada orang yang sihat. Setelah 10 tahun hidup, ia mencapai nilai maksimum. Jumlah imunoglobulin D meningkat semasa kehamilan, pada pesakit dengan penyakit tisu penghubung sistemik, asma bronkial, dan penyakit yang disebabkan oleh keadaan imunodefisiensi.

Bagaimana ELISA darah dilakukan?

Untuk enzim immunoassay, dalam kebanyakan kes, darah pesakit digunakan, kadang-kadang tisu vitreous, cairan saluran tulang belakang, dan cairan amniotik diambil.

Darah diambil melalui jarum suntikan ke dalam jarum suntik dari urat kubital. Kajian ini dilakukan semasa perut kosong. Harus diingat bahawa ubat-ubatan tertentu boleh mempengaruhi hasil ujian. Sebelum menderma darah, anda mesti menahan diri dari merokok, minum alkohol. Pengambilan ubat boleh memutarbelitkan hasilnya.

Sekiranya terdapat nilai negatif imunoglobulin IgM, IgG, IgA, kita dapat membicarakan ketiadaan penyakit atau fasa awalnya, dan hasilnya dengan minus adalah mungkin dengan pemulihan penuh setelah beberapa waktu.

Sekiranya IgA dan IgM tidak dikesan, dan IgG menunjukkan dirinya secara positif, maka kemungkinan besar kita membicarakan imuniti yang terbentuk setelah penyakit berjangkit, atau setelah vaksinasi.

Menguraikan ujian darah ELISA
Menguraikan ujian darah ELISA

Sekiranya IgA dan IgM tidak dikesan, dan IgG menunjukkan dirinya secara positif, maka kemungkinan besar kita membicarakan imuniti yang terbentuk setelah penyakit berjangkit, atau setelah vaksinasi

Sekiranya IgM titer tinggi dengan nilai IgG negatif, IgA, dapat disimpulkan bahawa terdapat penyakit berjangkit akut.

Nilai positif serentak hasil imunoglobulin - IgA, IgM, IgG adalah ciri fasa akut berulang penyakit kronik yang ada.

Untuk jangkitan kronik pada fasa penundaan proses (pengampunan), ELISA menunjukkan nilai negatif imunoglobulin M (IgM), sementara hasil imunoglobulin G (IgG) dan A (IgA) akan positif.

Imunoassay untuk parasit oleh ELISA

ELISA adalah singkatan untuk ujian imunosorben berkaitan enzim untuk parasit. Ini menunjukkan ujian perubatan sistem imun seseorang. Ujian ini berdasarkan kemampuan antibodi untuk mengubah warnanya. Kaedah diagnostik ini mempunyai banyak ciri positif. Sebagai contoh, dia dapat mengesan pelbagai jenis penyakit yang disebabkan oleh jangkitan. Ia paling berkesan dalam kes penyakit yang disebabkan oleh organisma parasit.

Apa yang diberikan oleh teknologi yang ditunjukkan: penentuan kehadiran helminths dalam darah; mencari patogen lain di dalam badan; anda boleh mengetahui sebab-sebab kemerosotan kesihatan anda; rawatan juga berdasarkan analisis yang diperoleh dengan cara ini; anda boleh memantau kesihatan sistem imun anda.

Ciri lain yang baik adalah keupayaan untuk mengesan penanda barah, tanpa mengira asal usulnya, tetapi tentu saja bergantung pada kehadirannya di dalam badan. Ujian ini juga sesuai untuk menerangkan keadaan sistem pembiakan manusia. Kehadiran protein, hormon dan peptida tertentu memungkinkan untuk menilai potensi pasangan dalam hal mengandung anak, dan juga andaian kualiti janin masa depan.

Ujian darah untuk Giardia adalah amalan yang cukup popular di kalangan doktor moden. Di samping itu, kaedah penyelidikan ini adalah alat yang sangat baik untuk analisis bioperubatan dan statistik kuantitatif dari segi antigen tertentu.

Bagaimana kaedah ELISA digunakan?

Adalah menjadi kesalahan besar untuk mengelirukan kaedah ELISA dengan kaedah menyiasat dan mengkaji tinja seterusnya. Yang terakhir dilakukan dengan menggunakan metode pada tingkat mikroskopik, ketika sampel tinja yang diberikan oleh pasien diambil, atau diambil dari calon pasien secara langsung di institusi perubatan. Dalam sampel, mereka cuba mengesan pencerobohan helminthik dan komponen lain, satu atau lain cara yang berkaitan dengan aktiviti penting parasit. Bukan hanya organisma parasit mikroskopik yang dipelajari, tetapi juga sisa-sisa, telur dan larva mereka.

Mentafsirkan ELISA mungkin tidak memberi anda pemahaman yang lengkap mengenai masalah ini, jadi lebih baik anda berjumpa doktor atau pembantu makmal. Adalah juga menjadi kesalahan untuk mempercayai bahawa kaedah ini hanya relevan jika helminths parasit pada usus. Banyak organ lain juga didiagnosis - parasit boleh hidup di duodenum, saluran empedu, hati dan bahkan di pankreas.

Benar, ini adalah kes yang lebih kompleks, jadi kualiti analisis sedemikian sangat bergantung pada pekerja makmal yang melakukan ujian. Ciri-ciri teknologi dan perbezaannya dari penyelidikan makmal lama:

  • sekarang, bukannya sampel najis, darah digunakan untuk menentukan kehadiran helminths;
  • kajian sampel dijalankan di makmal dengan cepat, pada keesokan harinya anda dapat maklumat lengkap;
  • kos penyelidikan makmal adalah murah, kerana teologi sangat sederhana;
  • ujian darah untuk helminths memberikan kadar ketepatan yang tinggi.

Kesesuaian dan kebolehlaksanaan keputusan ujian berkadar langsung dengan kelayakan pegawai perubatan, peralatan teknikal makmal, serta ketiadaan kecuaian atau kelalaian di kalangan doktor. Walau bagaimanapun, walaupun pembantu makmal yang paling prihatin dan bertanggungjawab akan mengalami kesulitan besar jika parasit terdapat di dalam tubuh dengan populasi minimum, atau jika klac dilakukan segera pada saat ujian.

Analisis imunologi darah oleh ELISA

Hanya sedikit orang yang mengetahui tentang ujian darah dari sudut pandang sistem imunologi manusia, kerana ujian ini tidak begitu biasa. Sebagai peraturan, ujian darah seperti itu memberikan maklumat mengenai virus imunodefisiensi di dalam tubuh manusia dan tidak diketahui namanya, kerana ia dilakukan atas permintaan pesakit.

Menguraikan ujian darah ELISA
Menguraikan ujian darah ELISA

Pada asasnya, untuk analisis ELISA, bahan biologi yang dikaji adalah darah, bagaimanapun, cecair serebrospinal, kandungan badan vitreous, cairan ketuban, dan lain-lain dapat diperiksa.

Untuk pengambilan sampel, darah yang diambil dari vena pada perut kosong digunakan, dari mana serum diperoleh untuk penyelidikan dengan sentrifugasi. Di samping itu, kajian serum darah dapat mendedahkan sejumlah penyakit kelamin (sifilis, herpes, klamidia), serta semua jenis hepatitis, campak, rubela, beguk dan toksoplasmosis.

Pada asasnya, untuk analisis ELISA, bahan biologi yang dikaji adalah darah, bagaimanapun, cecair serebrospinal, kandungan badan vitreous, cairan ketuban, dan lain-lain dapat diperiksa.

Immunoglobulin adalah molekul imun yang dapat mengikat dan meneutralkan kebanyakan patogen dan toksin berjangkit di dalam badan. Dalam kes ini, ciri imunoglobulin yang paling penting adalah kekhususannya, iaitu kemampuan untuk mengikat antigen tertentu. Ini adalah sifat inilah yang digunakan untuk melakukan ujian darah untuk imunoglobulin.

Terdapat lima jenis imunoglobulin, tetapi yang paling banyak dikaji adalah imunoglobulin A, M, dan G. Immunoglobulin M dan G aktif dalam darah. Immunoglobulin A adalah sejenis penghalang pada permukaan membran mukus, kerana terdapat dalam jumlah yang banyak.

Menguraikan ujian darah ELISA
Menguraikan ujian darah ELISA

Ujian darah imunologi membolehkan anda menentukan jenis imunoglobulin, berkat ini, ELISA bukan sahaja memungkinkan untuk mendiagnosis penyakit, tetapi juga menentukan tahap ini dan mengesan dinamika penyakit:

  • dalam 2 minggu pertama penyakit ini, hanya imunoglobulin A yang dijumpai;
  • dari minggu ke-2 hingga ke-3 penyakit ini, imunoglobulin A dan M dijumpai dalam darah;
  • CC3 selama 4 minggu, ujian darah untuk imunoglobulin ditentukan oleh ketiga-tiga jenis;
  • semasa pemulihan, imunoglobulin M hilang dalam darah, dan jumlah A dan G menurun 2 hingga 4 kali;
  • sekiranya terdapat proses kronik, imunoglobulin G semestinya ada di dalam darah, imunoglobulin M tidak ada, imunoglobulin A boleh hadir atau tidak ada.

Skop ujian darah imunologi oleh ELISA

  • Diagnostik penyakit virus: hepatitis, herpes, virus Epstein-Barr, sitomegalovirus, dll.
  • jangkitan kelamin: klamidia, gonorea, Trichomonas, mycoplasma, ureaplasma;
  • sifilis; endokrinologi (penentuan tahap hormon);
  • penanda tumor (diagnostik penyakit onkologi); imunologi (diagnostik imunodefisiensi);
  • alergi (diagnosis dan rawatan alahan).

Ujian darah serologi adalah kaedah ujian darah makmal yang digunakan untuk mendiagnosis penyakit berjangkit dan menentukan tahap proses menular. Tindak balas serologi didasarkan pada interaksi antibodi dan antigen.

Penentuan antigen digunakan untuk menentukan genus dan spesies mikroorganisma. Kaedah penyelidikan ini digunakan dalam urologi dan venereologi. Darah untuk ujian darah serologi diambil pada waktu pagi dengan perut kosong dari urat.

Petunjuk untuk temu janji dan penyakit yang dikesan dengan kaedah ELISA

Biomaterial utama untuk ELISA adalah serum darah: di makmal, sampel darah diambil dari pesakit dari urat, dari mana unsur-unsur berbentuk yang menyulitkan analisis akan dikeluarkan lagi. Dalam beberapa kes lain, cecair serebrospinal, cairan amniotik, smear membran mukus, dll digunakan untuk analisis.

Menguraikan ujian darah ELISA
Menguraikan ujian darah ELISA

Untuk mengelakkan penyelewengan pada hasilnya, disarankan untuk menderma darah ketika perut kosong, dan dua minggu sebelum kajian (jika tujuannya adalah untuk mendiagnosis penyakit berjangkit kronik, laten), adalah perlu untuk berhenti mengambil antibiotik dan ubat antivirus. Mustahil untuk merangkumi senarai penuh petunjuk untuk ELISA.

Matlamat analisis yang paling biasa adalah:

  • diagnostik penyakit berjangkit akut dan kronik: IgM dan IgG hingga hepatitis A, B, C, E virus, serta antigen hepatitis B dan C; IgG hingga HIV; Ig M dan IgG kepada jangkitan sitomegalovirus; Virus Ig M dan IgG hingga Epstein-Barr; Ig M dan IgG kepada jangkitan herpes; Ig M dan IgG toxoplasmosis;
  • Ig M dan IgG untuk campak, rubela, salmonellosis, disentri, ensefalitis bawaan kutu dan penyakit lain; IgG untuk penyakit parasit; Ig M dan IgG kepada jangkitan kelamin; Jangkitan IgG ke Helicobacter pylori. Penilaian umum penunjuk imuniti manusia dan penanda beberapa penyakit autoimun. Pengenalpastian penanda onkologi (faktor nekrosis tumor, antigen spesifik prostat, antigen kanser-embrio dan lain-lain). Penentuan kandungan hormon dalam serum darah (progesteron, prolaktin, testosteron, hormon perangsang tiroid dan lain-lain).

Kebaikan kaedah ELISA

Kelebihan ELISA yang tidak dapat dipertikaikan adalah kepekaan dan kekhususan kaedah yang tinggi. Sensitiviti adalah keupayaan untuk mengenali bahan sasaran, walaupun kepekatannya dalam sampel rendah. Kekhususan, sebaliknya, menunjukkan ketepatan diagnosis: jika hasilnya positif, itu bermaksud bahawa sebenarnya antibodi atau antigen yang dianggap telah dijumpai, dan bukan beberapa yang lain.

Menguraikan ujian darah ELISA
Menguraikan ujian darah ELISA

ELISA sebahagian besarnya telah menggantikan "standard emas" mikrobiologi - kaedah diagnostik bakteriologi, di mana, untuk mengenal pasti patogen, ia diperlukan untuk mengasingkannya dari badan, dan kemudian mengembangkan kultur pada medium nutrien dalam tabung uji selama beberapa hari.

Sepanjang masa, ketika analisis dilakukan, para doktor terpaksa merawat pasien secara "membabi buta", menebak tentang asal usul mikroorganisma oleh gejala penyakit ini. Penentuan IgM menggunakan ELISA membolehkan anda membuat diagnosis yang tepat pada hari-hari pertama penyakit ini.

Tahap pengilangan enzim immunoassay yang tinggi meminimumkan pengaruh faktor manusia, yang mengurangkan kemungkinan kesalahan. Sebilangan besar kit ujian dan reagen ELISA yang digunakan di makmal moden dihasilkan dalam persekitaran industri, yang menjamin hasil yang tepat.

Kelemahan kaedah ELISA

Menguraikan ujian darah ELISA
Menguraikan ujian darah ELISA

Malangnya, untuk menjalankan ELISA, anda perlu mengetahui apa sebenarnya yang harus dicari: teknik analisis menunjukkan bahawa doktor mempunyai andaian terlebih dahulu mengenai sifat penyakit ini. Oleh itu, tidak masuk akal untuk menetapkan ujian sedemikian dengan harapan "meneka" diagnosis secara tidak sengaja.

Dalam kes diagnosis penyakit berjangkit, enzim immunoassay tidak dapat menemui patogen dan menentukan sifat spesifiknya: ia hanya menunjukkan adanya antibodi dalam darah pesakit, secara tidak langsung menunjukkan adanya mikroorganisma asing di dalam tubuh manusia. ELISA adalah kaedah yang sangat tepat, tetapi tidak murah, jadi anda perlu menggunakannya dengan bijak, dan doktor yang berkelayakan harus menafsirkan hasilnya.

Kemungkinan hasil ELISA

Bergantung pada isi analisis, formulir mungkin berisi data dalam bentuk tabel yang menyenaraikan semua antibodi atau antigen yang ditandai dengan reaksi negatif atau positif, atau nilai kuantitatif hasilnya (negatif, lemah positif, positif atau tajam positif) akan ditunjukkan.

Pilihan terakhir menentukan berapa banyak antibodi yang terkandung dalam sampel yang dianalisis. Indikator kuantitatif lain adalah indeks ketersediaan antibodi, dinyatakan dalam bentuk peratusan. Ini menunjukkan berapa banyak masa yang telah berlalu sejak awal proses berjangkit (semakin tinggi indeks, semakin banyak).

Hari ini, beribu-ribu jenis sistem ujian ELISA dihasilkan, yang memungkinkan pengesanan antibodi dan antigen spesifik dalam pelbagai jenis patologi. Oleh itu, analisis ini digunakan di hampir semua industri perubatan. Diagnosis yang dibuat dengan bantuan ELISA adalah jaminan pelantikan terapi yang mencukupi dan rawatan penyakit yang berkesan.

Menguraikan ujian darah ELISA
Menguraikan ujian darah ELISA

Sekiranya anda mempunyai reagen yang diperlukan dan organisasi makmal yang baik, anda akan menerima keputusan ujian dalam 1-2 hari selepas pengumpulan darah. Dalam beberapa kes, jika tindak balas kecemasan diperlukan, tempoh ini dapat dikurangkan menjadi 2-3 jam.

Hasil ELISA berkualiti tinggi akan menjadi keputusan yang tidak jelas: bahan yang dikehendaki sama ada dijumpai atau tidak dijumpai dalam sampel. Sekiranya kita berbicara mengenai analisis kuantitatif, maka konsentrasi dapat dinyatakan sebagai nilai berangka atau sejumlah tanda "+" (dari satu hingga beberapa).

  • Ujian darah antibodi: mendiagnosis sistem imun
  • Ujian darah immunoassay dalam parasitologi

Disyorkan: